Лактозо-желатиновая среда (среда Роберта), 500 г (ФСЗ 2009/03705)

Описание

Характеристики

Приготовление и применение

135 г порошка суспендируют в 1000 мл тёплой дистиллированной воды, при необходимости подогревают до полного растворения желатина, разливают по 10 мл в пробирки 15 × 150 мм с завинчивающимися крышками и автоклавируют 15 минут при 121 °C. Готовую среду перед посевом прогревают до кипения для удаления растворённого кислорода и быстро охлаждают до температуры инкубации — клостридии анаэробны, и аэрированная среда даёт ложноотрицательный результат.

Посев инкубируют при 35–37 °C. Кислотообразование на лактозе окрашивает среду в жёлтый цвет и сопровождается газообразованием, а желатин под действием протеаз C. perfringens разжижается в течение 24–48 часов. Разжижение проверяют после охлаждения пробирки в холодильнике: если столбик остаётся жидким, желатин гидролизован. Среда используется как подтверждающая — её результат читают вместе с ростом на сульфит-циклосериновом агаре (TSC/SPS) и данными микроскопии.

Частые вопросы

«Среда Роберта», «лактозо-желатиновая среда», «Lactose Gelatin Medium» — это одно и то же?

Да, это одна и та же среда. В каталоге производителя она проходит как Lactose Gelatin Medium, M628, в русских прайсах встречаются написания «лактозо-желатиновая среда», «лактозно-желатиновая среда» и «среда Роберта». Её не следует путать со средой Робертсона (Robertson’s cooked meat medium, среда с кусочками варёного мяса, близкая к среде Китта-Тароцци) — это другая среда, она служит для накопления анаэробов, а не для их дифференциации по лактозе и желатину.

Как читать результат посева?

Положительным считают одновременное сочетание двух реакций: среда пожелтела и в столбике виден газ (ферментация лактозы) и желатин разжижен. Разжижение оценивают после охлаждения пробирки — желатин, который не был гидролизован, застывает. У C. perfringens разжижение наступает за 24–48 часов; если через 24 часа столбик ещё плотный, пробирку возвращают в термостат ещё на сутки.

Сколько готовой среды выйдет из упаковки 500 г?

Около 3,7 литра. Навеска составляет 135 г на 1000 мл, то есть 500 г хватает примерно на 370 пробирок при стандартном розливе по 10 мл. Это расчёт по навеске производителя без учёта потерь при розливе.

Обязательно ли прогревать среду перед посевом?

Да. Готовые пробирки перед посевом кипятят или прогревают на водяной бане и быстро охлаждают — это удаляет растворённый кислород. Если среда хранилась после автоклавирования более 8 часов, регенерация обязательна: без неё анаэробы могут не дать роста, и результат окажется ложноотрицательным.

Есть ли регистрационное удостоверение и подходит ли среда для пищевого производства?

Да, среда поставляется по регистрационному удостоверению ФСЗ 2009/03705 от 21.12.2012 как набор реагентов «питательные среды дифференциально-диагностические». Её применяют и в клинико-диагностических лабораториях, и в производственном контроле пищевых продуктов, где C. perfringens входит в число нормируемых показателей. Сертификат анализа на конкретную партию предоставляем по запросу.

Характеристики